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(Test non-pharmacopée). Résultats et discussion Après analyse des prescriptions, un cas extrême a été détecté: poids 1. 1 kg et débit de perfusion 1. 1 ml/h. La concentration limite en endotoxines a donc été fixée à 5 UI/mL. En utilisant de l'eau EEB, le taux de recouvrement n'est pas dans l'intervalle de validation. En utilisant du NaCl 0, 9% apyrogène, la méthode a pu être validée 3 fois. Test endotoxins bacteriennes de. La DMS a été fixée à 500 avec du NaCl 0. 9%. Le rôle et le mécanisme d'action du NaCl restent obscurs. L'hypothèse principale étant que le NaCl augmente la sensibilité des endotoxines en augmentant les forces de liaisons ioniques. Pour finir, la surcharge en endotoxines 5UI/mL a été détectée seulement 2 fois sur 3. Un contrôle positif et un contrôle négatif ont été réalisés. La concentration d'endotoxines retrouvée dans l'échantillon est de 3UI/mL et de 4UI/mL. La concentration à 5 UI/mL n'a pas été retrouvée malgré la validation des tests référencés à la pharmacopée. Conclusion Ce test est conforme à la pharmacopée.
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Elisabeth FARCY, Raphael VAZQUEZ, Marie-Noëlle GUERRAULT-MORO, Annie DURAND CHI Poissy-Saint germain en laye, France Introduction La pharmacie hospitalière cherche à centraliser la production de seringues vitamino-lipidique. Un test de stérilité et une stabilité physique dans le temps ont été réalisés au préalable sur ce mélange. La recherche des endotoxines bactériennes est préconisée par la pharmacopée européenne, pour les solutions stériles administrées par voie parentérale. Test endotoxins bacteriennes y. Le test LAL (lysat d'amoebocytes de limule) est utilisé pour quantifier la quantité d'endotoxine provenant des bactéries GRAM – en utilisant la capacité de réaction des aemobocytes des limules avec les endotoxines. L'objectif de cette étude est de valider la méthode dans une solution lipidique de nutrition parentérale. Matériels et méthodes Une machine Endosafe®-MCS, Charles River® a été utilisé avec des cartouches Charles River®'s pré-remplies en pro-enzyme et substrat synthétique (sensibilité 0. 005 UI/mL). Chaque cartouche contient 4 puits dont 2 surchargés en endotoxines (témoins positifs).
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I. 26. 1. Historique, nature et toxicité des endotoxines Le terme endotoxine, désigne des lipopolysaccharides (LPS) issus de la paroi des bactéries Gram négatif (Rudbach JA et coll., 1976). La toxicité des endotoxines bactériennes, bien que rarement létale, se manifeste généralement par de la fièvre, des frissons, des céphalées, des palpitations et de la cyanose. Ces manifestations appelées aussi effets pyrogènes, sont uniquement observées après administration parentérale des préparations pharmaceutiques contenant des substances pyrogènes dont les endotoxines. Kit De Test D'endotoxine KC,essai Chromogène Cinétique,TAL Chromogène Cinétique. Etant donné que l'activité pyrogène de ces dernières est beaucoup plus élevée que celle des autres substances ayant une structure chimique différente, il est souvent admis d'interpréter l'absence d'endotoxines bactériennes dans un produit pharmaceutique comme équivalent à l'absence de pyrogènes (Fennrich S et coll., 1999; et Hoffmann S et coll., 2005). I. 2. Techniques de recherche et de quantification des endotoxines bactériennes La recherche des endotoxines dans les préparations pharmaceutiques administrées par voie parentérale était habituellement effectuée sur des lapins.
Cette technique consistait à évaluer la réponse fébrile des lapins à l'administration du produit à tester. Un nouvel essai offre plusieurs avantages par rapport à l'essai sur le lapin est moins laborieux, moins cher et plus sensible. Tests d'endotoxines bactériennes. Il s'agit du test LAL. Le test LAL permet de rechercher et de quantifier in vitro des endotoxines produites par les bactéries Gram négatif, au moyen d'un lysat d'amœbocytes de limule (LAL). Le test LAL peut être réalisé selon trois techniques différentes (Le Minor L et Véron M, 1989): - la gélification qui induit la formation d'un gel en présence des endotoxines. L'avantage de cette méthode est sa simplicité, la décision de déclarer le résultat de l'essai positif ou négatif reposant sur la présence ou l'absence de gélification, visible à l'œil nu. - la turbidimétrie qui entraîne le développement d'un trouble par clivage d'un substrat endogène; - la colorimétrie qui entraîne le développement d'une coloration, suite au clivage d'un complexe peptide chromogène synthétique.
Pour effectuer le test, l'utilisateur pipette simplement 25 μl d'échantillon dans chacun des quatre puits d'échantillon de la cartouche. Le lecteur aspire et mélange l'échantillon avec le réactif LAL dans deux canaux (canaux d'échantillons) et avec le réactif LAL et le contrôle positif du produit dans les deux autres canaux (canaux témoins). L'échantillon est incubé puis combiné avec le substrat chromogène. Après le mélange, la densité optique des sources est mesurée et analysée par rapport à une courbe standard archivée en interne. Selon sa conception, la cartouche PTS effectue automatiquement un doublon de l'échantillon / un doublon du test de LAL de contrôle de produit positif, satisfaisant ainsi aux directives concernant le test d'endotoxine bactérienne (BET) USP harmonisé et de la FDA pour les tests LAL. Dosage des endotoxines bactériennes en méthode rFC : Une alternative fiable et pérenne au test LAL ! - ACM Pharma. Prospectus Endosafe